微流控流式細(xì)胞儀通過將微流控技術(shù)與流式細(xì)胞術(shù)相結(jié)合,實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞分選與下游分析功能的高度集成,其核心原理與實(shí)現(xiàn)方式如下:
一、核心原理:微尺度下的精準(zhǔn)操控
微流控流式細(xì)胞儀利用微米級通道(1-1000μm)實(shí)現(xiàn)流體的精準(zhǔn)操控,結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)的熒光檢測與分選能力,形成“檢測-分選-分析”一體化流程。其關(guān)鍵技術(shù)包括:
層流控制:微通道內(nèi)流體呈層流狀態(tài)(雷諾數(shù)Re<1),細(xì)胞運(yùn)動軌跡穩(wěn)定可預(yù)測,避免傳統(tǒng)方法中的湍流干擾。
熒光激活分選(FACS):通過熒光標(biāo)記細(xì)胞表面抗原或內(nèi)部物質(zhì),激光激發(fā)后產(chǎn)生散射光和熒光信號,經(jīng)光電倍增管轉(zhuǎn)換為電信號,計(jì)算機(jī)處理后識別目標(biāo)細(xì)胞。
物理分選機(jī)制:利用細(xì)胞大小、密度、彈性等物理特性,通過微柱陣列、慣性聚焦、聲表面波(SAW)等技術(shù)實(shí)現(xiàn)無標(biāo)記分選。
二、功能集成:從分選到分析的全流程
樣本預(yù)處理與進(jìn)樣
微流控芯片集成樣本過濾、稀釋等功能模塊,細(xì)胞懸液經(jīng)鞘流包裹后形成單列流,通過高壓或電動力驅(qū)動進(jìn)入檢測區(qū)域。
高通量檢測與分選
熒光檢測:激光束垂直照射細(xì)胞流,散射光反映細(xì)胞體積,熒光信號強(qiáng)度代表抗原或核內(nèi)物質(zhì)濃度。
分選執(zhí)行:根據(jù)檢測結(jié)果,通過電場、光鑷、PDMS微閥或相變閥等控制細(xì)胞流向。例如,電場切換可使帶電細(xì)胞偏轉(zhuǎn)至不同收集池;光鑷技術(shù)通過激光捕獲與移動實(shí)現(xiàn)微米級精確定位。
下游分析集成
實(shí)時形變分析:集成高速成像模塊,實(shí)時拍攝細(xì)胞形變、亮度、尺寸等參數(shù),結(jié)合熒光信號進(jìn)行多維度分析。
封閉式操作:樣本從進(jìn)樣到分析全程封閉,減少污染與操作誤差,提升數(shù)據(jù)可靠性。
三、技術(shù)優(yōu)勢:高效、精準(zhǔn)、低成本
高通量處理:陣列式并行通道設(shè)計(jì)支持每小時處理超50個樣本,分選10?個細(xì)胞僅需10分鐘。
高純度與回收率:分離純度達(dá)95%-99.9%,回收率超90%,細(xì)胞活性保留率超95%。
低成本與易用性:芯片批量生產(chǎn)降低單次分離成本(為傳統(tǒng)方法的1/5-1/10),自動化操作減少人工誤差,適合工業(yè)級細(xì)胞制備。
四、應(yīng)用場景
循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)檢測:通過DLD技術(shù)分選直徑20μm的CTCs,純度達(dá)99%以上。
免疫細(xì)胞治療:分選高活性CD8?T細(xì)胞,縮短擴(kuò)增周期2-3天,降低培養(yǎng)成本。
干細(xì)胞研究:高效處理微量活檢樣本,避免因樣本量不足導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)失敗。